哪位老师知道这个细长的杂质是什么 MRC-5贴壁细胞培养中遇到的

吧友能不能帮忙看看细胞是啥问题呀，没啥贴壁的

有100多种细胞系。低价出，都带str

一、百萤iFluor 560-dUTP*1mM TE 缓冲液(pH 7.5)*参数 Ex(nm) 560 Em(nm) 571 分子量 N/A 溶 剂 Water 存储条件 在-15℃以下保存，避光防潮 外 观 液体 二、百萤iFluor 560-dUTP*1mM TE 缓冲液(pH 7.5)*概述 iFluor 560-dUTP 是一种 iFluor 560 修饰的核苷酸，可用于各种分子生物学应用，例如 DNA 分子的标记和检测。它包含通过连接臂连接到脱氧尿苷三磷酸 (dUTP) 分子的 iFluor 560 染料。当在合成过程中掺入 DNA 时，iFluor 560-dUTP 可以使用荧光显微镜或其他基于荧光的测定法进行可视化。它常

质粒提取通常采用强碱裂解法，该方法由Birnboim和Doly在1979年发明，至今已成为实验室常规操作之一。今天给小伙伴们详细介绍在质粒提取过程中使用的不同溶液及其原理： 溶液P1 组分：25 mM Tris-HCl（pH 8.0），10 mM EDTA，50 mM 葡萄糖 作用：使菌体沉淀悬浮，Tris-HCl作为缓冲溶液维持pH稳定，EDTA螯合金属离子抑制DNase活性，葡萄糖增加粘度助于菌体悬浮。 溶液P2 组分：250 mM NaOH，1% SDS（十二烷基硫酸钠） 作用：细胞裂解，NaOH破坏细胞膜结构导致细胞裂解，

ChIRP-Mass是一种检测细胞内RNA/蛋白互作组的高通量技术。该技术通过联合探针Pulldown共沉淀技术和质谱检测技术，对目的RNA在特定细胞/组织内的互作蛋白，进行系统的检测和分析。该技术适用于目的RNA在特定细胞/组织中的蛋白互作组数据检测，或用于不同遗传背景/实验条件下的互作组差异研究。因此，该技术是研究细胞内RNA互作调控网络的常规前置技术。 ChIRP-WB是一种检测细胞内RNA/蛋白互作的靶向验证技术。通过联合探针Pulldown共沉淀和Western Blot检

1. 百萤iFluor 488-dUTP* 1mM的Tris缓冲液（pH7.5）*的应用 染料修饰的脱氧尿苷5'-三磷酸酯是通过常规酶掺入方法（例如反转录，缺口翻译，随机引物标记或PCR）生产染料标记DNA的常用方法之一。 这种酶促荧光标记方法广泛用于FISH探针和基于微阵列的实验。 该iFluor 488-dUTP缀合物与SpectrumGreen 滤光片组合一起用作绿色荧光（SpectrumGreen 是Vysis的商标）。 与常用的绿色探针（例如Fluorescein-12-dUTP）相比，iFluor 488提供了更明亮的信号，具有很高的光稳定性，并且

引文：该文的通讯作者是英国The University of Manchester（曼彻斯特大学）肿瘤研究所Tim Somervaille教授，该团队专注急髓白血病（AML）病理研究，聚焦AML分化的新药靶机理和医学转化。值得关注的是团队开发的新药靶赖氨酸脱甲基酶LSD1，其抑制剂已开展临床研究。进一步的转化结果，值得期待。本文是该团队于发表2023年11月22日发表在肿瘤Top期刊《Cancer Cell》上关于化药的药理文章。药物是临床试验中的化药CCS1477（Inobrodib），抑制靶点是乙酰修饰酶EP300/CBP

核酸电泳常见问题 1. 无条带或条带较弱 （1）上样量不足 尝试进一步增加上样量。 （2）核酸降解 在核酸提取和电泳过程中，使用分子生物学等级试剂，切勿使用含核酸酶的耗材，避免核酸酶污染。 （3）电泳缓冲液使用不当 TAE缓冲液短期内更适用于分离大片段，长时间运行易产热；TBE缓冲液对于更短片段更好，适用于长时间运行而不易导致过热，但可能会减缓线性dsDNA的迁移。 （4）DNA跑出凝胶 DNA小片段分子量较小，迁移速率快，容易跑出凝胶。可

求D-Hanks配方

蛋白酶消化液配置步骤 1．D-Hanks液高压灭菌之后，晾至室温，4℃保存备用。 2．称取一定量胰蛋白酶粉末于研磨器中(夏天时研磨器应放在冰浴中)，加入少量D-Hanks液研磨1 000次左右，调制成糊状。再放入4℃预冷的适量D-Hanks液中，4℃下磁力搅拌使完全溶解。 3．用NaHCO3干粉将胰酶溶液的pH值调至8.0左右(胰酶作用的最适pH值)，并加入0.02%EDTA以协助消化作用。 4．滤过除菌，-20℃冻存。 蛋白酶消化液配置过程中的注意事项： 1．BSS的pH值应确定为7.2左右。 2

在进行液体制剂的制备时，为了确保最终溶液达到预期的pH值和精确浓度，我们通常遵循以下步骤： 调节pH值：首先，我们需要将所需的溶质溶解在部分溶剂中，然后逐渐加入酸或碱来调整溶液的pH值至所需水平。在这个过程中，要不断地测量pH值，直至稳定在我们预定的数值。 定容到全量：pH值调节完成后，接下来就是定容操作。我们将溶液转移到容量瓶中，慢慢地加入溶剂，直到液面恰好与容量瓶的标线对齐。要注意的是，加溶剂的过程中要小心谨

一．碘化丙啶简介 碘化丙啶（Propidium iodide）是一个小分子芳香化合物，通常在研究和开发中作为荧光核酸结合染料。PI通常用于区分活细胞与凋亡细胞和坏死细胞,因为它可以自由渗透死亡或损伤细胞膜,而不能进入正常活细胞。碘化丙啶能染色核酸，如DNA和RNA，因此可用作流式细胞仪、原位杂交和免疫组织化学应用中细胞膜完整性的指示剂。 在样品中加入碘化丙啶后，细胞膜可逆性损伤的细胞将发出红色荧光。通过这种方式，碘化丙啶能够快速且可

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01 蛋白酶抑制剂 蛋白酶抑制剂的作用是什么？ 蛋白质纯化、提取过程中常受到其本身存在的水解酶的影响。在提取蛋白质的过程中细胞破碎释放出蛋白酶，这些酶在与欲提取的蛋白质接触时，一旦条件适宜，就会发生反应，导致蛋白质分解。因此，在蛋白质提取过程中，需要加人蛋白酶抑制剂以防止蛋白质水解以保持蛋白质的完整性。 蛋白酶抑制剂的作用原理是什么？ 蛋白酶抑制剂（protease inhibitor）从广义上指与蛋白酶分子活性中心上的一些基团

流动相是影响液相色谱的关键因素。一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，但是如何配制。选择配制的方法不同，分析结果特别是保留时间，是会有显著差别的。高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，水性溶剂也常用于缓冲液。常因资料上表示的内容和实际的配制方法不同，而产生流动

巨噬细胞极化是指巨噬细胞在不同微环境刺激下改变其表型的过程。巨噬细胞通常极化为 M1 或 M2 两种表型，分别释放促炎或抗炎因子，发挥不同的功能。M1型巨噬细胞由 Th1细胞因子（TNF-α、IFN-γ）和细菌成分（脂多糖等）诱导，活化的 M1 巨噬细胞吞噬并破坏微生物，清除肿瘤细胞，并将抗原呈现给 T 细胞以引起适应性免疫反应。M2型巨噬细胞由 Th2细胞因子（IL-4、IL-13）诱导，主要发挥抗炎和组织修复的作用，参与伤口愈合、血管生成和纤维化等过程

在生物学和心理学领域，旷场实验作为一种常用的行为学测试方法，被广泛用于评估动物的情绪状态、探索行为以及焦虑水平。然而，尽管这一实验方法看似简单直观，其实在实际操作中却涉及诸多细节和注意事项。为了确保实验结果的准确性和可靠性，我们必须对旷场实验的各个环节进行严格控制。 旷场实验的设计和实施需要考虑动物的特性。动物的昼夜节律、性别差异以及先前的处理经验都可能对实验结果产生影响。因此在进行实验前，我们需

简介： 两个大分子间的共价结合,比如抗体与酶或者酶与DNA,是研究人员一项重要的任务。有几种方法可用于交联两种生物大分子。常用的一种方法是使用小型交连剂(如磺化-SMCC)。SMCC的一端有一个胺反应性NHS酯基团,可与蛋白质上的自由胺(-NH2)发生反应;另一端有一个硫基反应性的马来酰基团,可与待连接生物大分子上的硫基(-SH)发生反应。由于蛋白质通常包含自由胺和硫基两种官能团,SMCC修饰的连接剂极不稳定且容易自反应,导致大量同型交联反应。此外,

细胞培养是指从体内组织取出细胞在体外模拟体内环境下，使其生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。细胞培养的培养物可以是单个细胞，也可以是细胞系。细胞复苏是细胞培养的重要环节，下面小编具体给大家介绍下细胞复苏的protocal和注意事项！ 01、细胞复苏的原理 细胞复苏是指将冻存在液氮或者-70℃冰箱中的细胞解冻之后重新培养，细胞恢复生长的过程。当恢复到常温状态时，细胞的形态结构保持正常，生化反即刻恢复。细胞复苏

免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术 (immunocytochemistry) 是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原 (多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究。它是组织化学的分支，它是用标记的特异性抗体 (或抗原) 对组织内抗原 (或抗体) 的分布进行组织和细胞原位检测技术。 一、免疫组化技术的基本原理 应用免疫学及组织

液氮罐是盛装液氮低温容器，其内外双胆+真空保温特性，能有效减缓液氮的挥发速度，但不能完全阻止液氮的蒸发。然而，冻存细胞通常需要完全淹没在液氮里，才能达到好的冷冻效果。那当液氮罐液氮不够时，对细胞会有影响吗？有什么影响？ 会有以下影响： 1. 细胞冻存质量下降：液氮是细胞冻存的重要冷冻介质，稳定的低温有助于保持细胞的活力和完整性。液氮不足会导致冷冻温度不稳定，可能损坏细胞结构，降低细胞冻存质量。 2. 细胞存活

实验技能分享免疫荧光 免疫荧光（Immunofluorescence，IF）是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一种强大的技术。它的原理是利用荧光标记的抗体作为探针对组织或细胞内的特定抗原进行定位和定性的分析。IF是一个很好的检测技术工具，用于研究感兴趣的产物如分子、蛋白质或糖蛋白的表达、定位、分布和迁移。 免疫荧光检测方法 直接免疫荧光：携带荧光素的抗体直接与抗原反应，形成抗原—荧光素标记抗体复合物。该法优点是较

t值是什么？ qPCR扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的荧光阈值时的所对应的扩增循环数（Cycle Threshold）。C代表Cycle，T代表Threshold。简单讲，Ct值就是qPCR中起始模板扩增达到一定产物量时，所对应的循环数。 为什么要有Ct值？ 模板量与Ct值的关系： 在PCR指数扩增过程当中，产物量与循环数之间的关系是：扩增产物量=起始模板量×（1+En）循环个数。 Ct值的设定： qPCR扩增产物量是以荧光信号的形式直接呈现，也就是扩增曲线。在扩增过程当中，

液氮是一种深低温的液体，其沸点约为-196。56°C。液氮的挥发速度受温度影响很大，夏季温度显然比冬季高很多，那夏季会加速液氮罐内液氮的挥发 对吗？ 对的！ 要知道，厂家给出的静态保存时间大多都是在室温23℃左右的测试结果，也就是夏季空调房的温度，如果你的液氮罐24小时都在这样的环境中，那液氮挥发不受季节影响，但如果是夏季工作人员离开后关闭空调，室内接近30℃，液氮挥发增加属正常现象。 毕竟我们用液氮罐不可能一直不打开

在学习过程中，我们经常会遇到各种PCR字眼，什么qPCR、RT-PCR、RT-qPCR、Real-Time PCR，你了解PCR这个大家族吗？还在傻傻分不清吗？ 一、什么是PCR？ PCR是聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction）的简称，是一种体外扩增特定DNA片段的分子生物学技术。PCR技术自问世以来，在生物科学领域、分子诊断领域、亲子鉴定、法医鉴定以及犯罪调查等方面发挥了巨大作用，是迄今为止最为重要的技术之一。经过演化和革新，PCR技术已经发展了三代：普通PCR技术、实时

Western blot是一个非常基础的实验，但是着实让我们头疼，即使是老手也挡不住WB实验的千锤百炼，懂得都懂，下面小编根据经验总结一篇WB实验过程会遇到的常见问题及解决方案，希望对正在做WB实验的小伙伴提供一个避雷参考！ 无条带 1.蛋白表达量低：充分了解研究的蛋白，表达量低适当增加上样量，20-50μg。 2.本底表达还是诱导表达，非特异性条带。 3.样本提取蛋白使用蛋白酶抑制剂，磷酸酶抑制剂，并设置对照，避免蛋白降解。 4.检查一抗特异性

吉星高照，开工大吉！祝龙年行好运，所盼皆实现！

细胞因子是由免疫细胞（如单核、巨噬细胞、T细胞、B细胞、NK细胞等）和某些非免疫细胞（内皮细胞、表皮细胞、纤维母细胞等）经刺激而合成、分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质。其作用是通过结合相应受体调节细胞生长、分化和效应，调控免疫应答。细胞因子，是细胞分化和行使功能时的产物，相当于人体内各类细胞间相互交的“信使”。它们被广泛地应用于医学诊断、抗癌治疗、免疫调节、以及自身免疫等多种领域。 常见细胞因

提到标准品和对照品，也许还有很多小伙伴并没有真正了解两者的含义和区别，更不能在工作中将两者良好的运用，今天小析姐就汇总了我们工作常见的但是又存在误区的词，这就一定不能漏掉标准品和对照品了，快来看看吧。 1、标准品 对照品与标准品是2个不同的概念，中国药典凡例中已有明确的定义： 对照品系指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质，而标准品系指用于生物检定、抗生素或生物药品中含量或效价测定的标准

提到标准品和对照品，也许还有很多小伙伴并没有真正了解两者的含义和区别，更不能在工作中将两者良好的运用，今天小析姐就汇总了我们工作常见的但是又存在误区的词，这就一定不能漏掉标准品和对照品了，快来看看吧。 1、标准品 对照品与标准品是2个不同的概念，中国药典凡例中已有明确的定义： 对照品系指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质，而标准品系指用于生物检定、抗生素或生物药品中含量或效价测定的标准

Western blot的洗液TBST是实验室常用的配制液体，对于TBST的配方也基本上相差不多，其中配方中就有一种组分是Tween-20，一种黄色或琥珀色澄明的油状液体，具有特殊的臭气和微弱苦味。用移液枪吸取时会有一种滞后感。为什么在Western blot的洗液TBST中要加入这么一种试剂，Tween-20在Western blot 中在发挥什么样的作用呢？ 1、Tween-20 首先了解一下什么是Tween-20。Tween-20也写作Tween 20，也称Polyethylene glycol sorbitan monolaurate，中文名为吐温-20或吐温20。Tween-20为黄色或

细胞迁移(Cell migration)：因其类似体外伤口愈合过程，又名伤口愈合实验(Wound healing assay)，是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。可用于可以观察药物、基因等外源因素对细胞迁移、修复和相互作用的影响。 基本原理：在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕/伤口”，划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕/伤口”愈合，于细胞迁移过程中在开始和定期捕获图像，通过测量不同时间点的划痕间距并

免疫组织化学技术：检测组织原位表达的肽类、激素、神经递质、细胞因子、受体、表面抗原等抗原性物质。 免疫 immuno- 抗原抗体的免疫反应 组织 histo- 检测组织中表达的抗原性分子 化学 chemistry 酶促/荧光可见反应 （一）组织和细胞标本的准备 1.组织标本的取材 —— 取材新鲜，固定及时，形态完好。 2. 细胞标本的准备 （1）活体细胞标本： 印片法、穿刺吸取法、沉淀法 （2）培养细胞标本： ① 细胞涂片: 将细胞制成悬液（10^6）涂在 涂有切片粘合

一、普通PCR与荧光定量PCR引物设计上的相同注意点 1.序列的查找是一致的，在NCBI上搜索不同物种的同一基因，序列选取应在基因的保守区段，选择合适片段长度 2.引物长度（primer length）常用的是18-27bp，但不应大于38bp，因为过长会导致其延伸温度太高，不适合 DNA 聚合酶进行反应 3.3’端最好不要有A，5’端可以容忍二聚体，但3’端一定不要有二聚体 4.不要有连续的GGG 或CCC、GCGC、CGCG之类，不要有错配，前后引物的退火温度要差不多，差异在2度以内 5.