动物造模：大小手术模型 药物诱导模型 模型评价监测：行为学检测 影像检测 生化生理指标检测 细胞培养 细胞爬片 细胞转染 流式细胞术 慢病毒包装 细胞划痕 细胞迁移 细胞侵袭 稳定株筛选等 硬组织切片 包埋 切片 染色 特殊染色 免疫组化 免疫荧光 荧光定量PCR服务 miRNA检测 DNA定量 甲基化测序 质粒提取 质粒构造 菌种鉴定 慧星实验 引物合成等 蛋白质纯化 蛋白质电泳 单克隆抗体制备 原核表达 免疫沉淀 免疫共沉淀 SILAC标记定量蛋白质组学 ELISA检

养细胞这件事儿，看似简单，然而却常常因为各种原因，让我们珍贵的实验细胞一再受损或者die。 本期博主就结合多年实践经验和细胞培养指南， 为大家讲述细胞从复苏、传代到冻存等一系列过程及常遇到的那些你可能忽略的小却重要的细节。 1⃣细胞的营养来源 2⃣细胞的居住环境 3⃣细胞的复苏与冻存 4⃣细胞的传代培养 以及常见问题解答 满满的干货与tips ，欢迎大家👍收藏，一起讨论交流呀

细胞培养是一门精细的艺术，每一个细节都可能影响到实验的成败。今天和大家讲讲细胞培养过程中，那些能让我们事半功倍的好习惯 1⃣ 孵箱的维护 每周检查孵箱：确保孵箱中有足够的水，避免因缺水导致孵箱过于干燥，影响细胞培养。 定期消毒：使用酒精或专用消毒剂，每周至少一次，以保持孵箱内部的清洁环境。 2⃣ 水浴锅的清洁和使用 每周换水：水浴锅内的水容易滋生微生物，定期更换可以防止污染。 实验前复温：在进行实验前，检查水

定量PCR（qPCR）是一种在PCR反应中实时监测核酸扩增产物的方法。为什么qPCR提RNA不提DNA？RNA更能反映gene的表达水平 依据中心法则，细胞内的DNA序列首先被转录成RNA分子，特别是信使RNA（mRNA），随后mRNA携带遗传信息，用于指导蛋白质的合成。mRNA的丰度和多样性是衡量基因表达水平的关键指标，它们直接关联到特定基因在特定时间和条件下的活性。与蛋白质相比，RNA的水平变化能够更快地反映基因表达的动态变化，因为RNA的稳定性相对较低，其水平变

※什么是实验外包？ 实验外包即将实验外包于独立科研机构之外的第三方实验室，已经成为发展趋势。 第三方实验室不仅实验设备先进，可操作实验的规模和种类也是多种多样，国家层面也出台政策推动科研单位与企业利用资源优势互补，提高科研效率。 ※为什么选择实验外包? 一，节省时间 实验周期长，耗费时间多，将实验外包可以节省大量时间。 二，节约费用 实验仪器繁多，价格昂贵，将实验外包可以节省实验设备采购，将有限的科研费用用

实验外包现在是越来越多人的选择了，大家也都从好奇，质疑走到了理解接受，这也是实验外包这个行业越来越被认可的原因，现在国家也鼓励资源最大化利用，高效科研，这也是这个行业壮大的原因之一 有人反馈说，现在是想要实验外包，但是不知道怎么找，不知道哪些比较靠谱，在此我想说的是——现在这个行业进入了发展的快车道，很多人都开始进入到这个行业，其中不乏毕业的博士生，实验器械公司，甚至还有刚毕业的大学生硕士生直接开

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实验外包

SD大鼠，8周龄，雄性。实验室温度18-25°C，常规饲养，自由饮食。 运动方式与条件：无负重游泳，玻璃缸游泳池，水深约为大鼠体长的两倍，水温为30-32°C。 心理应激模型的制备：采用大鼠旁观电击模型，电击组的大鼠（电流1-2mA，周期100s，间歇90s）被电击惊叫、惊跳；心理应激模型组大鼠不受电击，只是旁观电击组大鼠受电击的过程，通过视觉、听觉等产生心理应激应激于实验末日分批进行，持续30min。 分组域实验控制包括：a、对照组：不运动，

立足于生物医学实验、快速检测一站式技术服务，是很早推出整体实验外包的服务机构。 经过10余年的发展，我们与国内超过百余家的研究机构上千名研究人员共同完成了12000+的实验项目,在中国生物医药实验技术服务领域极具行业影响力。 是一家科研CRO整体外包服务提供商，主要服务项目：生物模型、分子生物学、免疫学、蛋白质学、细胞生物学、病理毒理病毒、快速检测等科研服务。 六大实验平台：动物实验平台、细胞实验平台、分子实验平台

免疫荧光（Immunofluorescence，IF）是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一种强大的技术。它的原理是利用荧光标记的抗体作为探针对组织或细胞内的特定抗原进行定位和定性的分析。IF是一个很好的检测技术工具，用于研究感兴趣的产物如分子、蛋白质或糖蛋白的表达、定位、分布和迁移。 免疫荧光检测方法 直接免疫荧光：携带荧光素的抗体直接与抗原反应，形成抗原—荧光素标记抗体复合物。该法优点是较简单，特异性较高；缺点

QPCR 干粉引物溶解稀释的一般方法如下： 收到引物后，在开启离心管盖前，在3000-4000转/分钟的转速下离心1分钟，以防开盖时引物干粉散失。因为引物在干燥过程中，寡核苷酸在EP管底部形成白色片状沉淀。鉴于运输过程中沉淀会飘起，在打开管盖之前进行简短离心这一步骤至关重要。 引物保存在高浓度的状况下比较稳定。如果对实验的重复性要求较高，合成的 OD 数较大，建议分装，避免反复冻融。 引物一般配制成10-100umol/l。 引物的浓度可以通过以

载体 在Cohen和Boyer的实验中，两种质粒都能在E. coli中复制。因此，这两种质粒都可以作为载体，使重组DNA得以复制。所有基因克隆实验都需要这样的载体，我们称之为载体（Vector），但典型的基因克隆实验只涉及一个载体，以及一个依赖于载体进行复制的外源DNA片段。外源DNA没有复制起点，即DNA复制开始的地方，因此除非将其放入具有复制起点的载体中，否则它无法复制。自20世纪70年代中期以来，已经开发了许多载体；这些载体分为两大类：质粒（pl

内参，顾名思义，就是内部参照。它在 Western Blot 实验中起到了重要的作用，用于校正蛋白质样本的加载量差异和检测系统的误差。就像是一把尺子，可以让我们在比较不同样本之间的蛋白质表达时有一个基准。 那么，如何选择内参呢？一般来说，我们需要考虑以下几个因素： 1、蛋白表达丰度：内参应该在样本中稳定表达，且表达量相对较高，这样才能有效地检测到内参信号。 2、分子量：内参的分子量应该与目标蛋白的分子量有明显差异，以便在

在所有RNA实验中，最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定，一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解，而所制备的RNA的纯度和完整性又可直接影响RNA分析的结果，所以RNA的制备与分析操作难度极大。 在实验中，一方面要严格控制外源性RNA酶的污染；另一方面要最大限度地抑制内源性的RNA酶。RNA酶可耐受多种处理而不

载体 在Cohen和Boyer的实验中，两种质粒都能在E. coli中复制。因此，这两种质粒都可以作为载体，使重组DNA得以复制。所有基因克隆实验都需要这样的载体，我们称之为载体（Vector），但典型的基因克隆实验只涉及一个载体，以及一个依赖于载体进行复制的外源DNA片段。外源DNA没有复制起点，即DNA复制开始的地方，因此除非将其放入具有复制起点的载体中，否则它无法复制。自20世纪70年代中期以来，已经开发了许多载体；这些载体分为两大类：质粒（pl

你还在为动物造模没有成功而苦恼吗，看过了，跟小编一起学习吧，手把手教学 模式动物品系：SPF级Wistar大鼠，健康，2weeks，雌雄各半，体重为150g-180g。 实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组低、中、高剂量组。 实验周期：4-6 weeks 建模方法： 取2周龄雄性SD大鼠，喂饲呋喃唑酮，按0. 2mg/g体重的剂量，每周按体重调整一次用药剂量，共10周；另取正常对照组为单纯母乳喂养及正常饲料作为对照。观察指标包括：①心电图检测：记录Ⅰ

摘眼球采血：此法常用于鼠类大量采血。采血时,用左手固定动物,压迫眼球，尽量使眼球突出，右手用镊子或止血钳迅速摘除眼球，眼眶内很快流出血液。

分子克隆实验——无缝克隆 今天和大家讲讲无缝克隆常见的问题以及解决方法。 1.平板上很少或者没有克隆菌落 建议使用试剂盒附带的阳性对照，可排除试剂盒本身的影响。进一步判定，主要有以下可能的情况和建议： 01载体制备 线性化载体和插入片段的纯度不够，抑制反应。 02插入片段制备 1、引物设计不正确：同源臂15~25nt（不计算酶切位点）,CG含量40~60%。 2、线性化载体和插入片段的纯度不够，抑制反应。若线性化载体与插入片段已经过纯化，

分子克隆实验——无缝克隆 今天和大家讲讲无缝克隆常见的问题以及解决方法。 1.平板上很少或者没有克隆菌落 建议使用试剂盒附带的阳性对照，可排除试剂盒本身的影响。进一步判定，主要有以下可能的情况和建议： 01载体制备 线性化载体和插入片段的纯度不够，抑制反应。 02插入片段制备 1、引物设计不正确：同源臂15~25nt（不计算酶切位点）,CG含量40~60%。 2、线性化载体和插入片段的纯度不够，抑制反应。若线性化载体与插入片段已经过纯化，

动物品系：成年健康大鼠 实验分组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组低、中、高三个剂量组 实验周期：N 建模方法：提起大鼠尾巴，置入小笼中。倒出适量乙醚于纱布上，置入鼠笼内，盖紧笼盖。待大鼠麻醉后取出，补充氯胺酮75～100mg/kg（ip）持续麻醉；阿托品20～30μg/kg腹腔注射，减少气道分泌物。固定大鼠仰卧于手术台上。剪除颈部及胸部被毛。纵形剪开颈部皮肤约1.5～2cm，分离皮下组织及肌肉。显露气管及其上甲状腺腺体。于腺体后

动物造模--骨质疏松小鼠模型 动物品系：SPF级C57BL/6鼠，健康，雌性未孕，6~8周，体重为18g~20g 实验分组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组 实验周期：12 weeks 建模方法： 小鼠3%腹腔麻醉后仰卧，腹部脱毛。在无菌条件下于腹股沟水平沿腹中线剪开皮肤及肌层，暴露腹腔。分离子宫并摘除卵巢，清理伤口后分两层缝合皮肤及基层，待小鼠清醒后，将其放回洁净笼具后放回饲养室饲养，定期观察小鼠状态及死亡情况并做好记录。术后3天，每只小

1、蛋白样品不能反复冻融； 2、蛋白样品应加蛋白酶抑制剂，以增加蛋白的稳定性（建议最好能多加几中种蛋白酶抑制剂）； 3、细胞水平要做Western Blot，一般地5×106个细胞提取的蛋白够就足Western Blot； 4、如果目标蛋白是膜蛋白和胞浆蛋白，所用的去垢剂就要温和得多，建议提取后最好加上NaF去抑制磷酸化酶的活性； 5、若转膜不完全，可以加大上样量，还有转移时你可以用降低电流延长时间，转膜液中甲醇的比例多加5－10％； 6、如果上样量超载，

1、蛋白样品不能反复冻融； 2、蛋白样品应加蛋白酶抑制剂，以增加蛋白的稳定性（建议最好能多加几中种蛋白酶抑制剂）； 3、细胞水平要做Western Blot，一般地5×106个细胞提取的蛋白够就足Western Blot； 4、如果目标蛋白是膜蛋白和胞浆蛋白，所用的去垢剂就要温和得多，建议提取后最好加上NaF去抑制磷酸化酶的活性； 5、若转膜不完全，可以加大上样量，还有转移时你可以用降低电流延长时间，转膜液中甲醇的比例多加5－10％； 6、如果上样量超载，

qPCR从样本采集到结果检出有很多的步骤，包括样本采集、样本保存、样本处理、样本检测、数据分析等一系列环节，不同的环节可以选择不同的对照进行监测，对照总体可分为阴性对照与阳性对照两类： 阴性对照 实验中经常遇到无法判断反应孔中的扩增信号是样本真实扩增还是污染扩增的情况，这就需要阴性对照来作为对比。常见的阴性对照有以下几种： ● 无模板阴性对照(No Template Control, NTC) NTC一般用纯化水代替，用以替代正常反应中的核酸样本

做过PCR的小伙伴都知道，PCR前期的验证引物探针性能和确定最适反应条件是确保正式实验顺利进行的前提。PCR实验中有个相当重要的工作——即是PCR扩增效率的评估。扩增效率是PCR检测性能最重要的指标之一，也是定量分析计算结果时所需要的参数。接下来，让小编给大家细细说来吧。 什么是扩增效率 PCR是一种DNA体外扩增技术，通常包括了30 - 50个循环周期。每个循环中，目标DNA分子的拷贝数最多会增加1倍。但在实际反应中，1个DNA分子在1个扩增循环

新的一年祝大家财源滚滚，否极泰来，身体健康，万事如意！

细胞迁移(Cell migration)：因其类似体外伤口愈合过程，又名伤口愈合实验(Wound healing assay)，是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。可用于可以观察药物、基因等外源因素对细胞迁移、修复和相互作用的影响。 基本原理：在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕/伤口”，划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕/伤口”愈合，于细胞迁移过程中在开始和定期捕获图像，通过测量不同时间点的划痕间距并

分子克隆（基因克隆/DNA重组/载体构建）技术是一种在分子水平上操作的技术，用于将特定的DNA片段从供体生物中分离出来，然后通过体外重组、转化和转导等方法，将其插入到适合的克隆载体中，并将重组克隆载体引入到合适的寄主体内进行复制与扩增。可以应用于蛋白表达、病毒包装、基因治疗、细胞治疗、mRNA疫苗、RNA干扰、细胞功能等研究。 具体操作流程：一、聚合酶链式反应（PCR）DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA来启动合成，

引物是一种短的DNA或RNA序列，用于在PCR（聚合酶链式反应）和其他分子生物学技术中扩增和检测特定的DNA或RNA序列。 引物通过与目标序列的互补碱基配对来定向扩增所需的DNA或RNA片段。在分子生物学研究中，引物的设计是非常重要的一步，因为它直接影响到PCR扩增的特异性和灵敏度。 一、普通PCR与荧光定量PCR引物设计上的相同注意点 1.序列的查找是一致的，在NCBI上搜索不同物种的同一基因，序列选取应在基因的保守区段，选择合适片段长度 2.引物长

随着我国老龄化社会的形成，心脑血管疾患逐渐成为严重影响人们生命健康的最主要疾病。心肌缺血将导致心肌细胞不可逆性坏死，被称为心肌梗死。作为终末分化细胞，大面积心肌细胞梗死将导致严重心脏功能不全危及患者生命及时恢复缺血心肌组织的血液灌注一“再灌注”是治疗急性心肌梗死唯一有效的方法。然而，当缺血心肌再次获得血液灌注后将导致比同时间单纯缺血更加严重的心肌损害，这一矛盾的现象被称为再灌注损伤。心肌缺血再灌注

细胞培养用的培养基是不是必须加双抗？血清在使用之前是不是一定要灭活？往培养基里加细胞因子又是什么操作？ 关于这三个问题，今天在这里分享一下我的看法。 要不要加双抗？ 在培养基中添加抗生素是一种常见的操作，其主要作用是抑制或杀死培养物中的某些细菌或真菌，从而避免它们对目标细胞的干扰和污染。 在培养实验中，选择适当浓度和种类的抗生素，可以有效地消除或减少杂菌、污染菌或其他不需要的微生物，保证培养物的纯度和

背景知识 CO-IP（免疫共沉淀）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X结合的蛋白质Y也能沉淀下来。 一、蛋白样品制备 裂解提取出免疫沉淀需要的蛋白样品，以下为HEK293T细胞样品的处理方法，其余的样品制备方法参阅相关文献。 单层贴壁细胞总蛋白的提取： 1、收集细胞：10cm细胞培养板上，每板细胞加1ml ，4℃预冷的PBS（0.01 M pH7.2～7.3）。反复冲洗把所有挂壁细胞洗

心肌梗死是一种严重的心血管疾病，由于冠状动脉血供急剧减少或中断，使心肌持续性缺血缺氧以致坏死，损害心功能且可能导致心律失常、休克以及心力衰竭等严重后果，已成为威胁人类生命健康的重大疾病之一。 目前建立心肌梗死动物模型的方法有多种，包括：冠脉结扎法、药物法、球囊堵闭法、栓塞法以及血栓形成法等。今天小助手根据粉丝们的后台留言，今天输出冠脉结扎法的实操步骤。 一、首先认识心脏的结构 冠状动脉结扎法操作简单、

高血压病是世界公认的心血管疾病的主要危险因素。所有心脑血管病相关死亡，约半数由高血压所致。临床上常用的抗高血压药，在降压及改善症状方面尚存在许多不足。现代医学对高血压的确切病因及发病机制尚存在许多未知，加强对高血压病因及发病机制的研究，开发出更有效的治疗药物是非常必要的。而实验研究离不开高血压动物模型，好的动物模型能够较好地模拟疾病状态，为全方位的研究提供可能。 动物的选择 常见的动物模型类别有鼠、

1. 平板长菌，但挑的单克隆菌落摇不起来？ 产生原因及解决办法： （1） 挑取的单克隆为杂菌，呈假阳性。出现这种情况的原因包括：①配制平板过程中，加入抗生素时温度过高致使抗生素灭活；②配制平板过程中，抗生素浓度过低；③平板培养时间太长导致抗生素失效。 （2）液体培养基的抗生素使用错误。 （3）液体培养基抗生素浓度过高，导致大肠杆菌生长缓慢。 （4）菌液保存太久，导致菌的活力过低。办法：重新划线涂板，挑取单克隆。 （5